纯甘油4℃保存方法对羊膜活性影响的研究

内容摘要:作者:吴晓燕李巧玉葛峰肖少春刘小雯何锐洪李兆兰冯志广 作者:吴晓燕李巧玉葛峰肖少春刘小雯何锐洪李兆兰冯志广 二甲基亚枫 目的探讨-80℃冰冻保存机采浓缩血小板的功能及止血效果。方法随机抽取冰冻保存3个月之内,3~6个月之间,6~9个月之间的冰冻血小板样品于42℃解冻后进行相关实验,比较不同保存时期冰冻血小板的功能及回收率;分血液病组和非血液病组观察患者输注冰冻血小板24h后出血症状的控制及校正血小板增高指数CCI值。结果冻存3个月内,3~6个月的两组冰冻血小板的粘附功能、聚集功能与新鲜机采血小板相比差异均无显著性(P>0.05);而冻存6~9个月的冰冻血小板的粘附功能与新鲜机采血小板相比则差异有非常显著性(P<0.01)。三组冰冻血小板的第Ⅲ因子活性测定与正常对照相比,均在正常范围;平均回收率为85.2%。两组患者在输注冰冻血小板24h后能有效控
内容摘要:作者:张军 崔巍 高伟 牧荣

作者:张军 崔巍 高伟 牧荣

  目的:观察-4℃纯甘油保存方法对羊膜活性的影响。方法:取健康剖宫产产妇胎盘,剥离羊膜,分成2cm×2cm小块,保存于-4℃纯甘油中,3,7,14,30,60,90d后,分别进行光镜,酶组织化学[乳酸脱氢酶(LDH)、琥珀酸脱氢酶(SDH)]及免疫组织化学[碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)]观察,并于新鲜羊膜对比。结果:光镜下,-4℃纯甘油保存60d以内羊膜上皮层结构较完整,可见少数细胞破裂。胞核脱失。90d组上皮层结构破坏明显,多数细胞破裂,核脱失。酶组织化学(LDH、SDH)及免疫组织化学(bFGF)显示:60d内各组于新鲜羊膜比较无显著差异性;各组间两两比较亦无显著性差异(P>0.05)。而90d组于新鲜对照组及各实验组间两两比较均有显著性差异(P<0.05)。结论:羊膜在-4℃纯甘油保存60d内;组织结构;上皮细胞活性稳定。

羊膜 活性 保存

  Effectofpreservationinglycerolat-4℃onamnioticmembranevitality

AbstractAIM:Toinvestigatethevitalityofamnioticmembranepreservedinglycerolat-4℃METHODS:Freshamnioticmembrane(AM)attachedtohealthyplacentaswastakenandpreservedinglycerolat-4℃.After3,7,14,30,60,90d,theepithelialstructure(lightmicroscope)andtheenzymeactivity(SDHandLDH)ofAMwasanalyzedbyimmunohistochemicalmethodcombiningwithimageanalysissystemtoinvestigatethechangesoftheexpressionofbasicfibroblastgrowthfactor(bFGF)inAM.RESULTS:MostoftheepithelialcellsofAMpreservedinglycerolat-4℃remainedintactafter60d.ThevitalityofAMhadastablelevel.CONCLUSION:ThevitalityofAMpreservedat-4℃glyceroldecreasedwithtime.After60-dpreservation,thevitalityofAMdecreasedsignificantly.Thereforeoperatorscanselecthigh-levelAMtotreatocularsurfacediseases.

·KEYWORDS:amnioticmembrane;vitality;preservation

  0引言

1995年Tseng[1]利用保存羊膜移植重建眼表获得成功。羊膜移植治疗眼表疾病已成为国内外眼科学者关注的热点。然而目前的研究多集中于羊膜移植的临床效果和作用机制。有关羊膜保存方法及其对羊膜活性影响的报道甚少。我们应用光镜,酶组织化学及免疫组织化学方法,探讨-4℃纯甘油保存方法对羊膜活性的影响,明确羊膜的有效保存时间。

1材料和方法

1.1材料取HBsAg、衣原体、人免疫缺陷病毒及梅毒均为阴性的健康孕妇剖宫产所获得的胎盘,在无菌条件下将胎盘用无菌生理盐水冲洗干净。置于含青霉素50mg/L、链霉素50mg/L、新霉素100mg/L、二性霉素B2.5mg/L的生理盐水中浸泡10min,钝性剥离羊膜,使其与绒毛膜分离。将羊膜平铺于粘贴手术巾的纸片上,羊膜的粗糙面与纸的粗糙面相贴,羊膜上皮面朝上[2,3]。然后将附有羊膜的纸片剪成2.5cm×2.5cm方形小块,放入无菌纯甘油3mL的小瓶中,并置于-4℃冰箱中保存。bFGF兔抗人抗体,北京中山生物制品有限公司提供。S-P试剂盒,北京中山生物工程有限公司提供。纯甘油(上海运佳黄浦制药有限公司提供,分析纯级)。

1.2方法40g/L中性甲醛固定,石蜡包埋后连续切片8张(4张免疫组化应用),厚约4μm,HE染色后光镜观察。将羊膜制成厚约8μm的冰冻切片,每个样本切8张,每种酶4张(其中一张为阴性对照),行乳酸脱氢酶(LDH)、琥珀酸脱氢酶(SDH)组织化学染色。应用图象分析系统(VIDS-21软件),随机测定8个高倍镜视野中羊膜上皮层光密度平均值。免疫组织化学染色(ABC法):石蜡切片脱蜡至水,自来水冲洗2~3min;双蒸水2次×2min。滴加bFGF一抗兔IgG,稀释度1∶200,37℃水浴箱内孵育1.5h,0.01mol/LPBS洗2min×3次,PBS代替一抗染色作为阴性对照。滴加生物素化山羊抗兔IgG(稀释度1∶300),37℃水浴箱内20min,0.01mol/LPBS洗2min×3次。DAB显色,镜下控制反应时间。脱水,透明,封片。图象分析系统(VIDS-21软件)随机测量8个高倍镜视野羊膜上皮层的光密度值。阴性对照以PBS代替一抗。

统计学处理:使用SPSS11.0统计处理软件,采用重复测量资料的方差分析,将各组结果平均值行单因素方差分析P<0.05表示有显著性差异。

2结果

2.1光镜观察羊膜分3层,自内向外为单层立方上皮细胞、厚而连续的基底膜和疏松的海绵状层,含成纤维细胞,无血管分布,其中胶原纤维丰富且连续,弹性纤维少。纯甘油-4℃保存羊膜3,7,14,30,60d羊膜上皮细胞层和基底膜较完整,少数上皮细胞可见核固缩,及空泡变性,但正常形态上皮细胞依然丰富。90d显示绝大数上皮细胞内空泡增多,明显的核固缩及核溶解,上皮细胞破裂丢失,甚至基底膜变。?鱿侄狭。

2.2酶组织化学测定LDH分布于细胞质中,呈蓝色颗粒,SDH分布于细胞质中,呈紫红色颗粒。保存3,7,14,30,60d,与新鲜对照组及各实验组间比较均无显著性差异(P>0.05);而90d组与新鲜对照组及其他各实验组间比较均有显著性差异(P<0.05,表1)。

内容摘要:作者:刘建华,韩立强,赵汉雨,莫娟,张素梅,潘玉善 作者:刘建华,韩立强,赵汉雨,莫娟,张素梅,潘玉善 目的研究不同提取方法对虎杖蒽醌类成分及其抗氧化作用的影响。方法采用回流、索氏、微波及超声四种提取方法,测定四种提取液中的游离蒽醌和总蒽醌的含量;采用DPPH,FRAP两种方法测定其抗氧化活性,并分析蒽醌类成分和抗氧化活性之间的关系。结果在对游离蒽醌的测定中以索氏法为最高(0.53%),其次为超声(0.45%),各种方法之间相比差异显著(P<0.05);在对总蒽醌的测定中,结果如下:索氏(1.16%)>超声(1.15%)>微波(1.04%)>回流(0.80%);抗氧化活性测定发现,以回流液的抗氧化能力最强,其次是微波,二者与超声和索氏的相比有显著性差异(P<0.05);相关性分析发现,蒽醌的含量与抗氧化活性呈显著的负相关(P<0.01)。结论不同提取方
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