80℃冻存外周血造血干细胞的应用研究

内容摘要:作者:吴晓燕李巧玉葛峰肖少春刘小雯何锐洪李兆兰冯志广 作者:吴晓燕李巧玉葛峰肖少春刘小雯何锐洪李兆兰冯志广 二甲基亚枫 目的探讨-80℃冰冻保存机采浓缩血小板的功能及止血效果。方法随机抽取冰冻保存3个月之内,3~6个月之间,6~9个月之间的冰冻血小板样品于42℃解冻后进行相关实验,比较不同保存时期冰冻血小板的功能及回收率;分血液病组和非血液病组观察患者输注冰冻血小板24h后出血症状的控制及校正血小板增高指数CCI值。结果冻存3个月内,3~6个月的两组冰冻血小板的粘附功能、聚集功能与新鲜机采血小板相比差异均无显著性(P>0.05);而冻存6~9个月的冰冻血小板的粘附功能与新鲜机采血小板相比则差异有非常显著性(P<0.01)。三组冰冻血小板的第Ⅲ因子活性测定与正常对照相比,均在正常范围;平均回收率为85.2%。两组患者在输注冰冻血小板24h后能有效控
内容摘要:作者:袁成录,史春雷,王玲,李颖,黄梅娟,王媛媛,高岱清

作者:袁成录,史春雷,王玲,李颖,黄梅娟,王媛媛,高岱清

造血干细胞移植;,,外周血干细胞;,,冻存方法

  摘要:目的:探求一种操作简便实用、造血干细胞回收率和存活率高、成本低的外周血造血干细胞的冻存方法。方法:CP-1和5%白蛋白作保护剂在80℃条件下直接冻存,并检测冻存前后外周血干细胞的活性,单个核细胞(MNC)和CFU-GM、CD34+细胞的回收率。结果:冻存前后外周血干细胞活性,单个核细胞(MNC)和CFU-GM、CD34+细胞的回收率无明显差异(P>0.05),输注后造血均重建。结论:CP-1和5%白蛋白作保护剂在80℃条件下直接冻存干细胞是一种简便、可靠、安全、成本低的外周血干细胞冻存方法,具有广泛的临床推广价值。

  关键词:造血干细胞移植;外周血干细胞;冻存方法

  StudyontheFreezingProceduretoStorePeripheralBloodStemCellsat-80℃

  Abstract:Objective:Toseekaconvenient,practicalfreezingprocedurewithhighrecoveryrateandsurvivalrateaswellaslowcosttostoreperipheralblood(PB)stemcells.Method:ThePBstemcellswerefrozeat80℃directlywithCP-1and5%albuminasprotectiveagents.TheactivityofPBstemcellsandrecyclerateofmononuclearcell(MNC),CFU-GMandCD34+cellsbeforeandafterfreezingweredetected.Result:TheactivityofPBstemcellsandrecoveryrateofMNC,CFU-GMandCD34+cellshavenosignificantdifferencesbeforeandafterfreezing(P>0.05).Hemopoiesiscouldbereconstructedafterinfusionall.Conclusion:Freezingstemcellsdirectlyat80℃byusingCP-1and5%albuminasprotectiveagentsisaconvenient,reliable,safeandlowcostproceduretostorePBstemcells,whichhasthepossibilitytobeusedinclinicalwidely.

  Keywords:Bloodstemcelltransfusion;Peripheralbloodstemcells;Freeze-saving

  以CP-1和5%白蛋白作干细胞保护剂直接80℃冰箱冻存外周血干细胞是一种简便、可靠、安全、成本低的外周血干细胞冻存方法,在造血干细胞移植(HCT)中已广泛应用。我科为14例病人所做的66次外周血干细胞冻存均采用以上方法,取得良好效果,现报告如下。

  1资料与方法

  1.1研究对象:2003年10月至2005年10月,进行外周血造血干细胞移植的病人14例,男8例,女6例;年龄13~53岁,平均42.5岁。急性淋巴细胞白血。ˋLL)4例,急性非淋巴细胞白血。ˋNLL)4例,非霍奇金淋巴瘤(NHL)4例,霍奇金淋巴瘤(HD)1例,多发性骨髓瘤(MM)1例。

  1.2外周血造血干细胞动员及采集:所有病人均采用自体外周血造血干细胞移植,采用MAG(米托醌、阿糖胞苷+粒细胞集落刺激因子)方案动员。米托醌8~10mg/×2d,阿糖胞苷2g/×3d,当联合化疗后白细胞下降到最低开始回升时应用粒细胞集落刺激因子(G-CSF),5~10μg/kg/d皮下注射,当白细胞>5.0×109/L时开始采集,应用CS-3000细胞分离机采集外周血干细胞,血循环量为10l/次,采集次数为1~2次,获得外周血干细胞的MNC中位数为4.5(3.0~6.9)×108/kg,CD34+细胞中位数5.2(4.2~18.9)×106/kg,CFU-GM为2.7(1.6~10.9)×105/kg。

  1.3外周血干细胞冻存:用CP-1(日本麒麟公司提供)和20%白蛋白配成冷冻液,与采集的干细胞混合,白蛋白的终浓度均为5%,然后分装于冷冻袋(50ml/支,美国百特公司)中,留取少许标本送检:胎盼蓝染色、MNC计数、CD34+细胞和CFU-GM检测。平放于冷冻夹中,直接放入-80℃冰箱(日本三洋公司)中保存。

  1.4解冻回输:回输前将冷冻袋从-80℃冰箱中取出,立即放入40℃的温水中解冻,保证1min内细胞完全溶解,然后在30min内将解冻的干细胞回输给病人。回输前应用抗组织胺药物和地塞米松预防过敏反应,回输时密切观察病人的生命体征。回输后将冷冻袋中干细胞残留液立即送检:胎盼蓝染色、CD34+细胞和CFU-GM检测。

  1.5指标检测:外周血干细胞冷冻前后分别做胎盼蓝染色、MNC计数、CD34+细胞和CFU-GM检测,并比较冷冻前后胎盼蓝染色、MNC计数、CD34+细胞和CFU-GM的数值,计算回收率。

  1.5.1胎盼蓝拒染率:用2%胎盼蓝溶液染色,计数100个单个核细胞。

  1.5.2MNC计数:用血细胞计数仪测定单个核细胞数量,血片瑞氏染色油镜分类,计数单个核细胞的比例。

  1.5.3CD34+细胞数量:应用流式细胞仪(BectonDickinson公司)进行CD34+细胞的测定。

  1.5.4CFU-GM测定:采用琼脂办固体培养,5%CO2培养箱培养10d,计数集落数量。

  1.6外周血干细胞造血重建:自体外周血干细胞回输后中性粒细胞、血小板恢复时间。即中性粒细胞>0.5×109/L的天数,血小板不输注情况下,血小板>20×109/L的天数。干细胞回输后14d和28d分别做骨髓检查。

内容摘要:骨髓腔内注射造血干细胞移植旨在促进HSC的归巢。近年来已有大量的动物实验肯定了不同来源供体细胞通过骨髓腔内注射能有效地归巢并植入骨髓、迅速重建受体造血和免疫功能、减少GVHD,诱导同种异基因器官移植免疫耐受,提高受体生存率。本文主要对该技术在骨髓移植、脐血移植、研究HSC生物学特性等方面的作用以及临床应用前景进行综述。 骨髓腔内注射造血干细胞移植旨在促进HSC的归巢。近年来已有大量的动物实验肯定了不同来源供体细胞通过骨髓腔内注射能有效地归巢并植入骨髓、迅速重建受体造血和免疫功能、减少GVHD,诱导同种异基因器官移植免疫耐受,提高受体生存率。本文主要对该技术在骨髓移植、脐血移植、研究HSC生物学特性等方面的作用以及临床应用前景进行综述。 骨髓腔内注射   ProgressofResearchandApplicationonHematopoieticStem
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